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對肽樣品的質(zhì)譜分析前使用SPE小柱脫鹽的操作方法

更新時間:2015-07-03      點擊次數(shù):6101

對肽樣品的質(zhì)譜分析前使用SPE小柱脫鹽的操作方法 

SPE脫鹽操作對于LC-MS分析很重要,對于常規(guī)LC-UV分析不是必需操作。 

試劑和設備:所有的試劑應在使用前新鮮配制。 

當使用1 mL C18 SPE柱時 (貨號:218SPE1000)時,推薦的操作方法是: 

  1. 1.0 mL 乙腈預活化小柱。 
  2. 0.5 mL 0.1% TFA水溶液預平衡小柱。然后用0.5mL再重復一次。 
  3. 0.2 mL 含有0.1-0.2% TFA的肽樣上樣到SPE柱上,肽被SPE保留。 
  4. 0.5 mL 0.1% TFA水溶液清洗SPE小柱,除去弱保留的雜質(zhì)。 
  5. 0.2 mL 75:25 (或甚至 90:10) 不含任何TFA的乙腈/水溶液將肽從SPE柱上洗脫下來。 
  6. 使用氮氣流(或使用真空離心管,加熱不應超過30攝氏度)將洗脫收集物揮發(fā)至約10 μL。 
  7. 加入190 μL 含有0.2% 甲酸和 0.01% TFA的 5:95 乙腈/水溶液。 
  8. 渦旋混合后,樣品存放在冰箱中。此樣品即可用于LCMS進樣分析。 

注意:要讓溶液流過SPE小柱,可在SPE柱管上方施加正壓。施加正壓的辦法可以是將一個1000μL 塑料吸液槍頭(pipet tip)加在氮氣管路上,然后將此吸液槍頭摁在SPE小柱的頂端開口端。

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